細胞STR鑒定檢測
STR即短串聯(lián)重復序列(Short Tandem Repeats),也稱微衛(wèi)星DNA(microsatellite DNA),是一段包含1-6bp的重復DNA序列。STR廣泛存在于原核動物和真核動物中,人類中也不例外,約占人類基因組的3%。由于其多態(tài)性和高突變率,STR在生物學研究中得到了廣泛的應用,又被稱為細胞的DNA指紋。咨詢電話:13816144967(微信同號)
由于STR技術的高靈敏度、自動化程度高、準確快速、重復性好等優(yōu)點,STR基因分型已被作為金標準應用于細胞鑒定,由于細胞系交叉污染或錯誤辨識而導致研究錯誤、結果不可重復等情況的存在,因此建議在實驗開展前進行細胞的STR鑒定分析。
細胞STR鑒定即通過STR信息建立細胞系的遺傳特性,通過STR鑒定來檢測細胞是否發(fā)生交叉污染或者誤認的情況。STR 基因座位上的等位基因可通過擴增區(qū)域內重復序列拷貝數(shù)的不同來區(qū)分,在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結果與細胞STR數(shù)據(jù)庫比對,從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系名稱。
STR基因位點由長度為3~7個堿基對的短串連重復序列組成,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標記,被稱為細胞的DNA指紋。 STR基因座位上的等位基因可通過PCR擴增區(qū)域內重復序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分,在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別,隨后通過一定的計算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結果與專業(yè)的細胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系名稱。 STR的鑒定結果能證明以下問題: 1. 是否為人源細胞;2. 是否為標準細胞系;3. 是否存在物種內交叉污染。據(jù)統(tǒng)計,約18%~30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,使用該細胞可能導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果等。 2009年起,NIH和ATCC呼吁研究者對細胞進行STR鑒定并著手建立細胞STR數(shù)據(jù)庫。如今,細胞STR鑒定已是鑒別細胞身份及交叉污染的金標準。多數(shù)權威期刊也要求作者投稿時提供細胞STR鑒定證明。《中國藥典》中明確規(guī)定,新建細胞系/株、細胞庫和生產終末細胞應進行鑒別試驗,以確認為本細胞,且無其他細胞的交叉污染。
什么時候需細胞STR鑒定?
? 當實驗室引入新的細胞系
? 細胞來源于組織 – 原代細胞
? 文章發(fā)表,國外期刊雜志要求
? 細胞功能不正常
? 細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結果與預期差別較大
? 細胞已連續(xù)培養(yǎng)2個月時,實驗室細胞常規(guī)定期鑒定
? 當實驗室使用超過一種細胞系時,所有細胞系最好先鑒定以排除交叉污染的可能
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