腸道病毒滅活檢測

腸道病毒是一大類病毒的總稱，它們的共同特點是通過消化道感染和傳播，主要包括脊髓灰質(zhì)炎病毒，柯薩奇病毒、埃可病毒和新型腸道病毒。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)

腸道病毒具有傳染性，人腸道病毒主要通過消化道感染人體，主要引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病、口咽和呼吸道疾病、心血管疾病和眼病等，嚴重者可危及生命。有趣的是，腸道病毒很少引起胃腸道疾病，它們主要引起的是腸道外疾病，最常見的疾病包括脊髓灰質(zhì)炎(也稱為小兒麻痹癥)、無菌性腦膜炎、手足口病和心肌炎等。

腸道病毒EV71感染是人腸道病毒的一種，簡稱為EV71，常引起兒童手足口病、病毒性咽峽炎，重癥患兒可出現(xiàn)心肌炎、肺水腫、腦炎等，統(tǒng)稱為腸道病毒EV71感染疾病。該病多發(fā)生于兒童，尤其是3歲以下嬰幼兒多發(fā)，少數(shù)病情較重，嚴重的會引起死亡。

V71滅活疫苗（人二倍體細胞）滅活工藝驗證

目的：

對腸道病毒71型（enterovirus 71,EV71）滅活疫苗（人二倍體細胞）的滅活工藝進行驗證。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)

方法：

取3批次經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活病毒收獲液樣品,分別連續(xù)盲傳4代,并設(shè)病毒對照盲傳4代。觀察每代次樣品的細胞病變情況,采用微量滴定法檢測病毒感染性滴度,ELISA法檢測EV71特異抗原含量,實時定量PCR法檢測病毒核酸水平及病毒負鏈產(chǎn)生情況。

結(jié)果：

3批滅活的疫苗病毒收獲液樣品經(jīng)4次盲傳后,各代次均未出現(xiàn)明顯的細胞病變,經(jīng)微量滴定法均未檢測到EV71感染性滴度。滅活的病毒收獲液盲傳至第2代時,病毒負鏈檢測已為陰性;至第3代時,EV71抗原檢測為陰性;至第4代時,病毒核酸檢測為陰性。病毒對照經(jīng)盲傳4代后,各代次均出現(xiàn)明顯細胞病變;自第2代開始,感染性滴度維持在106~107 CCID50/ml,抗原含量為200~370 U/ml,且均可檢測出明顯的病毒核酸及病毒負鏈增殖。

結(jié)論通過經(jīng)典的＂細胞上盲傳3代＂的檢測方法,并結(jié)合實時定量RT-PCR對病毒核酸和負鏈進行檢測,證實經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活疫苗樣品已完全滅活。

EV71 滅活疫苗具有良好的免疫原性

接種EV71滅活疫苗可刺激機體產(chǎn)生抗EV71的免疫力，用于預(yù)防EV71感染所致的 手足口病。EV71滅活疫苗接種后28天，血清抗體陽轉(zhuǎn)率為88.1%～100%。目前關(guān)于EV71疫苗免疫持久性研究數(shù)據(jù)有限，根據(jù)對Ⅲ期臨床研究對象的跟蹤觀察，接種后56天至8個月，EV71中和抗體滴度有所下降，8～14個月抗體水平處于相對穩(wěn)定狀態(tài)，但抗體陽性率未見下降。免疫后兩年的觀察結(jié)果顯示，中和抗體水平和臨床保護效力仍然維持在較高水平。接種2劑次EV71滅活疫苗對于EV71感染相關(guān) 手足口病的保護效力為90%～97.45%，對于EV71引起的相關(guān)疾病的保護效力為80.4%～88.0%。對柯薩奇病毒A16型（CV A16）和其他腸道病毒感染 手足口病無保護效力。不同基因型毒株的免疫原性研究結(jié)果顯示，疫苗株對EV71不同基因型和亞型具有交叉保護作用。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)